تأثیر عصاره مخمر بر فعالیت آنتیاکسیدانی و تولید آلکالوئیدهاي تروپانی در کشت موئین بذرالبنج مشبک

Question

تأثیر عصاره مخمر بر فعالیت آنتیاکسیدانی و تولید آلکالوئیدهاي تروپانی در کشت ریشههاي موئین بذرالبنج مشبک

حسین برخورداری · Answer

تأثیر عصاره مخمر بر فعالیت آنتیاکسیدانی و تولید آلکالوئیدهای تروپانی در کشت ریشههای موئین بذرالبنج مشبک

ﮔﻮﻧﻪﻫﺎي ﺑﻨﮓداﻧﻪ )ﻫﯿﻮﺳﯿﺎﻣﻮس( ازﺟﻤﻠﻪ ﺑﺬراﻟﺒﻨﺞ ﻣﺸﺒﮏ (ﻣﻨﺎﺑﻊ ﻏﻨﯽ آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎي ﺗﺮوﭘﺎﻧﯽ، reticulatus L. ﻋﻤﺪﺗﺎً ﻫﯿﻮﺳﯿﺎﻣﯿﻦو اﺳﮑﻮﭘﻮﻻﻣﯿﻦﻣﯽﺑﺎﺷﻨﺪ ﮐﻪﺑﻪدﻟﯿﻞ اﺛﺮاتﮔﺸﺎد ﮐﺮدنﻣﺮدﻣﮏ ﭼﺸﻢ،ﺿﺪ اﺳﭙﺎﺳﻢ، آﻧﺘﯽﮐﻮﻟﯿﻨﺮژﯾﮏ، آرامﺑﺨﺶو ﻣﺴﮑﻦ ﻣﻮرد اﺳﺘﻔﺎده ﻗﺮار ﻣﯽﮔﯿﺮﻧﺪ. ﺑﻪدﻟﯿﻞ ﺳﺎﺧﺘﺎر ﺷﯿﻤﯿﺎﯾﯽ ﭘﯿﭽﯿﺪه، اﯾﻦ آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎ از ﻣﻨﺎﺑﻊ ﻃﺒﯿﻌﯽ ﺑﻪﻃﻮر ﻋﻤﺪه ﮔﯿﺎﻫﺎن ﺗﯿﺮه ﺳﯿﺐزﻣﯿﻨﯽﺑﺪﺳﺖﻣﯽآﯾﻨﺪ.اﻟﻘﺎءﻣﺴﯿﺮﻫﺎيﺑﯿﻮﺳﻨﺘﺰيﻣﺘﺎﺑﻮﻟﯿﺖﻫﺎيﺛﺎﻧﻮﯾﻪﺑﻪوﺳﯿﻠﻪﻣﺤﺮكﻫﺎيﻣﺨﺘﻠﻒ،راﻫﮑﺎرﻣﺆﺛﺮيﺑﺮاياﻓﺰاﯾﺶ ﺗﻮﻟﯿﺪوﺑﻬﺮهوريﻣﺘﺎﺑﻮﻟﯿﺖﻫﺎيﺛﺎﻧﻮﯾﻪﻣﯽﺑﺎﺷﺪ.دراﯾﻦ ﭘﮋوﻫﺶ،ﺑﻪﻣﻨﻈﻮراﻓﺰاﯾﺶﺗﻮﻟﯿﺪآﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎيﺗﺮوﭘﺎﻧﯽ،ازرﯾﺸﻪﻣﻮﺋﯿﻦﺑﺪﺳﺖ A آﻣﺪهازرﯾﺰﻧﻤﻮﻧﻪﻫﺎيﮐﻮﺗﯿﻠﺪوﻧﯽﺗﺮارﯾﺨﺖﺷﺪهﺑﺎﺳﻮﯾﻪ اﮔﺮوﺑﺎﮐﺘﺮﯾﻮم راﯾﺰوژﻧﺰاﺳﺘﻔﺎدهﮔﺮدﯾﺪ.اﯾﻦآزﻣﺎﯾﺶدرﻗﺎﻟﺐﻓﺎﮐﺘﻮرﯾﻞ 7 ﻣﯿﻠﯽﮔﺮم ﺑﺮ ﻟﯿﺘﺮ( و ﻓﺎﮐﺘﻮر دوم، زﻣﺎنﻫﺎي 1000 و 500 ،250 ،125 ﺷﺎﻣﻞ ﻓﺎﮐﺘﻮر اول، ﻏﻠﻈﺖﻫﺎي ﻣﺨﺘﻠﻒ ﻋﺼﺎره ﻣﺨﻤﺮ )ﺻﻔﺮ، ﺳﺎﻋﺖ( و ﻫﺮ ﺗﯿﻤﺎر در ﺳﻪ ﺗﮑﺮار اﻧﺠﺎم ﮔﺮدﯾﺪ.ﻣﻄﺎﺑﻖ ﻧﺘﺎﯾﺞ ﺑﺪﺳﺖ آﻣﺪه، ﺑﻪﺗﺮﺗﯿﺐ ﺑﯿﺸﺘﺮﯾﻦ ﻣﯿﺰان 72 و 48 ،24) ﻣﺨﺘﻠﻒ ﺗﯿﻤﺎر ﻣﯿﻠﯽﮔﺮمﺑﺮﻟﯿﺘﺮﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮ 250و500 ﺑﺮاﺑﺮﺑﯿﺸﺘﺮازﺷﺎﻫﺪ(،دراﺛﺮﺗﯿﻤﺎرﺑﺎﻏﻠﻈﺖﻫﺎي 2/5) ﺑﺮاﺑﺮ(واﺳﮑﻮﭘﻮﻻﻣﯿﻦ 2)ﻫﯿﻮﺳﯿﺎﻣﯿﻦ ﺳﺎﻋﺖﺗﺤﺮﯾﮏزاﯾﯽﺑﺪﺳﺖآﻣﺪ.ﻧﺘﺎﯾﺞﻧﺸﺎنداد،ﺗﯿﻤﺎرﺑﺎﻏﻠﻈﺖﻫﺎيﻣﺨﺘﻠﻒﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮوﻧﯿﺰاﻓﺰاﯾﺶﻣﺪتزﻣﺎن 48 درﻣﺪتزﻣﺎن ﺗﯿﻤﺎرﻣﻨﺠﺮﺑﻪﮐﺎﻫﺶﻣﻌﻨﯽداررﺷﺪرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦدرﻣﻘﺎﯾﺴﻪﺑﺎﮐﺸﺖﻫﺎيﺷﺎﻫﺪﮔﺮدﯾﺪ.ﻫﻤﭽﻨﯿﻦﻓﻌﺎﻟﯿﺖآﻧﺰﯾﻢﻫﺎيآﻧﺘﯽاﮐﺴﯿﺪاﻧﯽ ﺷﺎﻣﻞﮐﺎﺗﺎﻻز،ﮔﺎﯾﺎﮐﻮلﭘﺮاﮐﺴﯿﺪازو آﺳﮑﻮرﺑﺎتﭘﺮاﮐﺴﯿﺪازدررﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦﺗﯿﻤﺎرﺷﺪه،درﻣﻘﺎﯾﺴﻪﺑﺎﺷﺎﻫﺪﺑﯿﺸﺘﺮﺑﻮد.ﺑﺮاﺳﺎس ﻣﻨﺠﺮﺑﻪاﻟﻘﺎءﺗﻨﺶاﮐﺴﯿﺪاﺗﯿﻮﺷﺪهاﺳﺖ.ﻧﺘﺎﯾﺞﺣﺎﺻﻞازاﯾﻦﭘﮋوﻫﺶﭘﯿﺸﻨﻬﺎد ، ﻧﺘﺎﯾﺞ،ﭼﻨﯿﻦاﺳﺘﻨﺒﺎطﻣﯽﺷﻮدﮐﻪﺗﻬﯿﯿﺞﺑﺎﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮ ﻣﯽﮐﻨﺪﮐﻪﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮﻣﯽﺗﻮاﻧﺪﺑﻪﻋﻨﻮانﻣﺤﺮﮐﯽﻣﺆﺛﺮﺑﺮاي اﻓﺰاﯾﺶﺗﻮﻟﯿﺪﻣﺘﺎﺑﻮﻟﯿﺖﻫﺎيﺛﺎﻧﻮﯾﻪﮔﯿﺎﻫﯽازﺟﻤﻠﻪآﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎيﺗﺮوﭘﺎﻧﯽ درزﯾﺴﺖﻓﻨﺎوريﮔﯿﺎﻫﯽﻣﻮرداﺳﺘﻔﺎدهﻗﺮارﮔﯿﺮد.

ﻫﯿﻮﺳﯿﺎﻣﯿﻦ (دو آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪ ﺗﺮوﭘﺎﻧﯽ اﺻﻠﯽ در ﮔﯿﺎﻫﺎن Scopolamine) (ﻫﺴﺘﻨﺪ ﮐﻪ ﺗﺮﮐﯿﺐﻫﺎﯾﯽ Solanaceae) ﺧﺎﻧﻮاده ﺳﯿﺐزﻣﯿﻨﯽ A ) ﺑﺎﺧﺎﺻﯿﺖﭘﺎراﺳﻤﭙﺎﺗﻮﻟﯿﺘﯿﮏ (ﻣﯽﺑﺎﺷﻨﺪو nticholinergic ﺑﻪﻃﻮر ﮔﺴﺘﺮده در درﻣﺎن ﻃﯿﻒ وﺳﯿﻌﯽ از ﺑﯿﻤﺎريﻫﺎ ﻣﻮرد Zayed ) اﺳﺘﻔﺎده ﻗﺮار ﻣﯽﮔﯿﺮﻧﺪ &(.ﺑﺬراﻟﺒﻨﺞ Wink, 2004 Hyoscyamus ) ﻣﺸﺒﮏ (ﺑﻮﻣﯽ ﻣﻨﺎﻃﻖ reticulatus L. ﺧﺸﮏوﻧﯿﻤﻪﺧﺸﮏﻣﺼﺮ،ﺟﻨﻮبﻏﺮبآﺳﯿﺎ،اﯾﺮانوﺗﺮﮐﯿﻪ ، اﺳﺖ.ﮔﺰارش ﺷﺪه اﺳﺖ ﮐﻪ آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪ اﺻﻠﯽ اﯾﻦ ﮔﯿﺎه ﻫﯿﻮﺳﯿﺎﻣﯿﻦ و ﭘﺲ از آن اﺳﮑﻮﭘﻮﻻﻣﯿﻦ و ﺳﺎﯾﺮ ﺗﺮﮐﯿﺐﻫﺎي آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪي ﻣﺎﻧﻨﺪ آﭘﻮﻫﯿﻮﺳﯿﺎﻣﯿﻦ، ﻧﻮرﻫﯿﻮﺳﯿﺎﻣﯿﻦ، ﻟﯿﺘﻮرﯾﻦ و Ionkova, ) ﺗﺮوﭘﯿﻦﻣﯽﺑﺎﺷﺪ 2002(. آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎي ﺗﺮوﭘﺎﻧﯽ ﻋﻤﺪﺗﺎً در رﯾﺸﻪ ﺳﻨﺘﺰ ﺷﺪهوﺑﻌﺪ ﻫﻤﭽﻨﯿﻦ ﺑﺎ ﺗﻮﺟﻪ ﺑﻪ ، ﺑﻪ اﻧﺪامﻫﺎي ﻫﻮاﯾﯽ ﻣﻨﺘﻘﻞ ﻣﯽﺷﻮﻧﺪ ﺟﺎيﮔﯿﺮي اﺧﺘﺼﺎﺻﯽ ﺑﻌﻀﯽ از آﻧﺰﯾﻢﻫﺎي ﮐﻠﯿﺪي درﮔﯿﺮ در ﻣﺴﯿﺮﺑﯿﻮﺳﻨﺘﺰاﯾﻦآﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎ)ﺑﻪﻋﻨﻮانﻣﺜﺎلﺑﯿﺎنواﺑﺴﺘﻪﺑﻪ (و ﺟﺎيﮔﯿﺮي PMT) ﭘﺮﯾﺴﯿﮑﻞ ﭘﻮﺗﺮﯾﺴﯿﻦ ﻣﺘﯿﻞ ﺗﺮﻧﺴﻔﺮاز H ) -ﺑﺘﺎ -ﻫﯿﺪروﮐﺴﯿﻼز 6- اﺧﺘﺼﺎﺻﯽ ﻫﯿﻮﺳﯿﺎﻣﯿﻦ (در 6H ﭘﺮﯾﺴﯿﮑﻞ رﯾﺸﻪ(، ﺗﻼش ﺑﺮاي ﺗﻮﻟﯿﺪ ﺗﺮوﭘﺎن آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎ ﻋﻤﺪﺗﺎً ، ﺑﻪوﯾﮋه اﺳﮑﻮﭘﻮﻻﻣﯿﻦ در ﺳﯿﺴﺘﻢﻫﺎي زﯾﺴﺖﻓﻨﺎوري Palazon ) ﻣﺒﺘﻨﯽﺑﺮﮐﺸﺖرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦﻣﯽﺑﺎﺷﺪ et al., (.روﯾﮑﺮدﻫﺎي ﻣﺘﻌﺪدي ﻣﺜﻞ اﺳﺘﻔﺎده از ﻣﺤﺮكﻫﺎي 2008 ﻣﺘﻔﺎوت و ﺗﺤﺮﯾﮏ ﻣﺴﯿﺮ ﺑﯿﻮﺳﻨﺘﺰي ﺑﺮاي اﻓﺰاﯾﺶ ﺗﻮﻟﯿﺪ ﻣﺘﺎﺑﻮﻟﯿﺖﻫﺎ در ﮐﺸﺖ رﯾﺸﻪﻫﺎي ﻣﻮﺋﯿﻦ اﺗﺨﺎذ ﺷﺪه اﺳﺖ )Hasanloo (.ﺗﻬﯿﯿﺞ ﯾﺎ ﺗﺤﺮﯾﮏزاﯾﯽ روﻧﺪي et al., 2009 اﺳﺖ ﮐﻪ ﺑﻪوﺳﯿﻠﻪ اﻟﻘﺎء ﺳﯿﺴﺘﻢﻫﺎي دﻓﺎﻋﯽ ﮔﯿﺎﻫﺎن، ﺑﺎﻋﺚ اﻓﺰاﯾﺶ ﺳﺎﺧﺖ ﻣﺘﺎﺑﻮﻟﯿﺖﻫﺎي ﺛﺎﻧﻮﯾﻪ ﮔﯿﺎﻫﺎن ﺷﺪه و ﺑﻘﺎء، Namdeo, ) ﺗﺪاوم و رﻗﺎﺑﺖﭘﺬﯾﺮي آﻧﻬﺎ را ﺗﻀﻤﯿﻦ ﻣﯽﮐﻨﺪ (.ﮐﺎرﺑﺮد ﻋﺼﺎره ﻣﺨﻤﺮ در ﮐﺸﺖ رﯾﺸﻪﻫﺎي ﻣﻮﺋﯿﻦ 2007 Azadirachta )ﭼﺮﯾﺶ ﻣﯿﻠﯽﮔﺮمﺑﺮ 5/20 (ﺑﺎﺗﻮﻟﯿﺪ indica 3/31) ﮔﺮم آزادﯾﺮاﮐﺘﯿﻦ، ﻣﯿﺰان آن را ﻧﺴﺒﺖ ﺑﻪ ﺷﺎﻫﺪ Srivastava & ) ﺑﺮاﺑﺮ اﻓﺰاﯾﺶ داد 1/6 ﻣﯿﻠﯽﮔﺮم ﺑﺮ ﮔﺮم( (.درﮐﺸﺖرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦﮔﯿﺎهﺧﺮﻓﻪ Srivastava, 2013
)Portulaca روزهﺗﯿﻤﺎر 28 رﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦ ،( oleracea L ﺑﺮاﺑﺮ ﺳﻄﺢ 5 ﺗﺎ ،ﺳﺎﻋﺖ 48 ﺷﺪه ﺑﺎ ﻋﺼﺎره ﻣﺨﻤﺮ ﺑﻪﻣﺪت Pirian) ﺗﻮﻟﯿﺪﻧﻮرآدرﻧﺎﻟﯿﻦرادرﻣﻘﺎﯾﺴﻪﺑﺎﺷﺎﻫﺪاﻓﺰاﯾﺶداد Salvia &(.در ﮐﺸﺖ رﯾﺸﻪﻫﺎي ﻣﻮﺋﯿﻦ Piri, 2013 اﻓﺰاﯾﺶ رﺷﺪ ،(2001) و ﻫﻤﮑﺎران Chen ،miltiorrhiza ﮔﺮمﺑﺮﻟﯿﺘﺮ 7/3 ﮔﺮمﺑﺮﻟﯿﺘﺮﺑﻪ 3/9 رﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦرا از وزن ﺧﺸﮏ ﮔﺰارش ﮐﺮدﻧﺪ.ﺗﯿﻤﺎر رﯾﺸﻪﻫﺎي ﻣﻮﺋﯿﻦ ﮔﯿﺎه ﻣﯿﻠﯽﮔﺮمﺑﺮ ﻟﯿﺘﺮ 0/5 ﺑﺎﻋﺼﺎره ﻣﺨﻤﺮﺑﺎ ﻏﻠﻈﺖ Pueraria ﺑﺮاﺑﺮي ﻧﺴﺒﺖ ﺑﻪ ﺷﺎﻫﺪ ﮔﺮدﯾﺪ 4/5 ﺑﺎﻋﺚ اﻓﺰاﯾﺶ )Udomusk (.از اﺛﺮات ﺷﻨﺎﺧﺘﻪ ﺷﺪه ﻣﺤﺮك et al., 2010 اﯾﺠﺎد ﺗﻨﺶ در ﮔﯿﺎﻫﺎن و ﺗﻮﻟﯿﺪ رادﯾﮑﺎلﻫﺎي ، ﻋﺼﺎره ﻣﺨﻤﺮ Savitha ) آزاد ﻣﯽﺑﺎﺷﺪ (.اﯾﻦ ﺗﺮﮐﯿﺐﻫﺎ ﻧﻘﺶ et al., 2006 ﭘﯿﺎمﺑﺮ ﺛﺎﻧﻮﯾﻪ را در ﭘﺎﺳﺦﻫﺎي ﺳﻠﻮﻟﯽ ﺑﺮ ﻋﻬﺪه دارﻧﺪ وﻟﯽ ﻣﻘﺎدﯾﺮ ﺑﺎﻻي آﻧﻬﺎ ﺑﺎﻋﺚ آﺳﯿﺐ ﺷﺪﯾﺪ ﺑﻪ ﺳﻠﻮل ﻣﯽﺷﻮد )Mittler (.ﮔﯿﺎﻫﺎن ﺑﻪوﺳﯿﻠﻪ ﺳﯿﺴﺘﻢﻫﺎي et al., 2011 آﻧﺘﯽاﮐﺴﯿﺪانآﻧﺰﯾﻤﯽوﻏﯿﺮآﻧﺰﯾﻤﯽرادﯾﮑﺎلﻫﺎيآزادراﮐﻨﺘﺮل ﮐﺮده و از اﯾﻦ ﻃﺮﯾﻖ اﺛﺮات ﻣﺨﺮب آﻧﻬﺎ را ﮐﺎﻫﺶ ﻣﯽدﻫﻨﺪ )Vranova (.ﺑﺎﺗﻮﺟﻪﺑﻪاﯾﻨﮑﻪﺗﻮﻟﯿﺪ ﺳﺮﯾﻊو et al., 2002 اﻧﺒﻮه ﻣﺘﺎﺑﻮﻟﯿﺖﻫﺎي ﺛﺎﻧﻮﯾﻪ از ﻃﺮﯾﻖ روشﻫﺎي ﺷﯿﻤﯿﺎﯾﯽ ﻋﻤﺪﺗﺎًﭘﺮﻫﺰﯾﻨﻪ،ﻣﺸﮑﻞوﯾﺎﻏﯿﺮﻣﻤﮑﻦﻣﯽﺑﺎﺷﺪوﻧﯿﺰﺑﻪدﻟﯿﻞ اﻫﻤﯿﺖ اﻗﺘﺼﺎدي اﯾﻦ ﻣﺘﺎﺑﻮﻟﯿﺖﻫﺎ و ﺗﻮﻟﯿﺪ اﻧﺪك آﻧﻬﺎ در ﮔﯿﺎﻫﺎن داروﯾﯽ، راﻫﮑﺎرﻫﺎﯾﯽ ﻣﺜﻞﮐﺸﺖ رﯾﺸﻪﻫﺎي ﻣﻮﺋﯿﻦ و اﺳﺘﻔﺎده از ﻣﺤﺮكﻫﺎي زﯾﺴﺘﯽ و ﻏﯿﺮزﯾﺴﺘﯽ ﻣﯽﺗﻮاﻧﺪ ﺗﻮﻟﯿﺪ اﯾﻦ ﻣﺘﺎﺑﻮﻟﯿﺖﻫﺎ را ﺑﻬﺒﻮد ﺑﺒﺨﺸﺪ. ﺑﻨﺎﺑﺮاﯾﻦ، در اﯾﻦ ﭘﮋوﻫﺶ ﺗﺄﺛﯿﺮ ﻋﺼﺎره ﻣﺨﻤﺮ ﺑﻪﻋﻨﻮان ﻣﺤﺮك زﯾﺴﺘﯽ، در ﻏﻠﻈﺖﻫﺎ و زﻣﺎنﻫﺎي ﻣﺨﺘﻠﻒ ﺗﯿﻤﺎر، ﺑﺮ اﻓﺰاﯾﺶ ﺗﻮﻟﯿﺪ آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎي رﺷﺪ و ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ، ارزﺷﻤﻨﺪ ﻫﯿﻮﺳﯿﺎﻣﯿﻦ و اﺳﮑﻮﭘﻮﻻﻣﯿﻦ آﻧﺘﯽاﮐﺴﯿﺪاﻧﯽ رﯾﺸﻪﻫﺎي ﻣﻮﺋﯿﻦ ﮔﯿﺎه ﺑﺬراﻟﺒﻨﺞ ﻣﺸﺒﮏ ﻣﻮرد ﺑﺮرﺳﯽﻗﺮارﮔﺮﻓﺖ. ﻣﻮادوروشﻫﺎ ﮐﺸﺖﮔﯿﺎهﺑﺬراﻟﺒﻨﺞﻣﺸﺒﮏ ﮐﻠﯿﻪ آزﻣﺎﯾﺶﻫﺎي ﻣﺮﺑﻮط ﺑﻪ ﮐﺸﺖ و آﻧﺎﻟﯿﺰ ﻣﻮﻟﮑﻮﻟﯽ و ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ آﻧﺰﯾﻤﯽ در آزﻣﺎﯾﺸﮕﺎه ﮔﺮوه ﻋﻠﻮم ﺑﺎﻏﺒﺎﻧﯽ داﻧﺸﮕﺎه اروﻣﯿﻪ و آﻧﺎﻟﯿﺰ ﻓﯿﺘﻮﺷﯿﻤﯿﺎﯾﯽ آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎي ﺗﺮوﭘﺎﻧﯽ در آزﻣﺎﯾﺸﮕﺎهﻓﯿﺘﻮﺷﯿﻤﯽداﻧﺸﮕﺎهآزاداردﺑﯿﻞاﻧﺠﺎمﺷﺪ.ﺑﺬرﻫﺎي ﮔﯿﺎه ﺑﺬراﻟﺒﻨﺞ ﻣﺸﺒﮏ از ﺷﺮﮐﺖ ﭘﺎﮐﺎن ﺑﺬر اﺻﻔﻬﺎن ﺗﻬﯿﻪ ﺑﺬرﻫﺎدرداﺧﻞﻣﺤﯿﻂﮐﺸﺖ ، ﮔﺮدﯾﺪ.ﺑﻌﺪازﺿﺪﻋﻔﻮﻧﯽﺑﺬرﻫﺎ %آﮔﺎر،ﮐﺸﺖودراﺗﺎق 7 %ﺳﺎﮐﺎرزو 3 ﺗﮑﻤﯿﻞﺷﺪهﺑﺎ MS ﺳﺎﻋﺖ16 درﺟﻪﺳﺎﻧﺘﯽﮔﺮادودورهﻧﻮري 25 رﺷﺪﺑﺎدﻣﺎي ﺳﺎﻋﺖﺗﺎرﯾﮑﯽﻧﮕﻬﺪاريﺷﺪﻧﺪ. 8 روﺷﻨﺎﯾﯽو اﻟﻘﺎءوﺑﻬﯿﻨﻪﺳﺎزيﻇﻬﻮررﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦ ﺑﻪﻣﻨﻈﻮر ﺗﻠﻘﯿﺢ رﯾﺰﻧﻤﻮﻧﻪﻫﺎي ﮔﯿﺎﻫﯽ، ﮐﻮﺗﯿﻠﺪونﻫﺎ از دﻗﯿﻘﻪ درون 3 ﮔﯿﺎﻫﭽﻪﻫﺎي ﻣﺎدري اﺳﺘﺮﯾﻞ ﺟﺪا و ﺑﻪﻣﺪت Agrobacterium ﺳﻮﺳﭙﺎﻧﺴﯿﻮن ﺑﺎﮐﺘﺮﯾﺎﯾﯽ rihzogenes A ﺳﻮﯾﻪ ﻏﻮﻃﻪورﺷﺪﻧﺪ.رﯾﺰﻧﻤﻮﻧﻪﻫﺎيﺗﻠﻘﯿﺢﺷﺪهﺑﻪﻣﺤﯿﻂ 7 ﺟﺎﻣﺪ)ﻣﺤﯿﻂ ﻫﻢﮐﺸﺘﯽ( ﻣﻨﺘﻘﻞ و ﺑﻪﻣﺪت MS ﮐﺸﺖ درﺟﻪﺳﺎﻧﺘﯽﮔﺮادو 25 ﺳﺎﻋﺖ،داﺧﻞاﻧﮑﻮﺑﺎﺗﻮرﺑﺎدﻣﺎي 48 در ﺷﺮاﯾﻂ ﺗﺎرﯾﮑﯽ ﻧﮕﻬﺪاري ﺷﺪﻧﺪ. ﺳﭙﺲ ﺑﻪﻣﻨﻈﻮر ﺣﺬف ﺑﺎﮐﺘﺮي، رﯾﺰﻧﻤﻮﻧﻪﻫﺎ ﺑﻪوﺳﯿﻠﻪ آب ﻣﻘﻄﺮ اﺳﺘﺮﯾﻞ ﺣﺎوي ﻣﯿﻠﯽﮔﺮم در ﻟﯿﺘﺮ(ﺷﺴﺘﺸﻮ و ﺑﻪ ﻣﺤﯿﻂ 100) ﺳﻔﻮﺗﺎﮐﺴﯿﻢ ﻣﯿﻠﯽﮔﺮم در 100 ﺟﺎﻣﺪ ﺑﺪون ﻫﻮرﻣﻮن ﺣﺎوي MS ﮐﺸﺖ ﻫﻔﺘﻪ ﭘﺲ از ﺗﻠﻘﯿﺢ 2 . ﻟﯿﺘﺮ ﺳﻔﻮﺗﺎﮐﺴﯿﻢ ﻣﻨﺘﻘﻞ ﺷﺪﻧﺪ رﯾﺰﻧﻤﻮﻧﻪﻫﺎ، ﺑﻪ ﺗﺪرﯾﺞ رﯾﺸﻪﻫﺎي ﻣﻮﺋﯿﻦ ﻇﺎﻫﺮ ﺷﺪﻧﺪ.ﺑﻌﺪ از ﮔﺬﺷﺖ ﯾﮏ ﻫﻔﺘﻪ، ﺑﺮاي اﻓﺰاﯾﺶ رﺷﺪ رﯾﺸﻪﻫﺎي ﻣﻮﺋﯿﻦ در ﻣﺤﯿﻂ ﺟﺎﻣﺪ، ﻫﺮ ﯾﮏ از رﯾﺰﻧﻤﻮﻧﻪﻫﺎي رﯾﺸﻪدار ﺑﻪﺻﻮرت ﺟﺎﻣﺪﻋﺎرياز MS ﺗﮑﯽوﻻﯾﻦﻫﺎيﻣﺠﺰاﺑﻪﻣﺤﯿﻂﮐﺸﺖ ﻣﯿﻠﯽﮔﺮم در ﻟﯿﺘﺮ ﺳﻔﻮﺗﺎﮐﺴﯿﻢ ﻣﻨﺘﻘﻞ 100 ﻫﻮرﻣﻮن و ﺣﺎوي روز 10 ﮔﺮدﯾﺪﻧﺪ.واﮐﺸﺖ رﯾﺰﻧﻤﻮﻧﻪﻫﺎ در ﻣﺤﯿﻂ ﺟﺪﯾﺪ ﻫﺮ ﻻﯾﻦ رﯾﺸﻪﻣﻮﺋﯿﻦاﻟﻘﺎءﺷﺪه، 75 ﯾﮏﺑﺎراﻧﺠﺎم ﺷﺪ.ازﻣﯿﺎن ﯾﮏﻻﯾﻦﭘﺮرﺷﺪﺑﺮاياﻧﺠﺎمﻣﺮاﺣﻞﺑﻌﺪيآزﻣﺎﯾﺶاﻧﺘﺨﺎب ﮔﺮدﯾﺪ. ﺗﻬﯿﯿﺞرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦﺑﺎﻣﺤﺮكﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮ (اﯾﺘﺎﻟﯿﺎ Liofilchem) ﻋﺼﺎره ﻣﺨﻤﺮ از ﺷﺮﮐﺖ ﻟﯿﻮﻓﯿﻠﮑﻢ MS ﺗﻬﯿﻪﮔﺮدﯾﺪ. ﺑﺮاياﻧﺠﺎماﯾﻦآزﻣﺎﯾﺶﻣﺤﯿﻂﮐﺸﺖﻫﺎي 1000 و 500 ،250 ،125 ﻣﺎﯾﻊ ﺣﺎوي ﻏﻠﻈﺖﻫﺎي ﺻﻔﺮ،
ﮔﺮم از 1/5 . ﻣﯿﻠﯽﮔﺮم در ﻟﯿﺘﺮ ﻋﺼﺎره ﻣﺨﻤﺮ ﺗﻬﯿﻪ ﮔﺮدﯾﺪ روزه داﺧﻞ ﻫﺮ ﯾﮏ از ارﻟﻦ ﻣﺎﯾﺮﻫﺎي 10 رﯾﺸﻪﻫﺎي ﻣﻮﺋﯿﻦ ﻣﺎﯾﻊ MS ﻣﯿﻠﯽﻟﯿﺘﺮﻣﺤﯿﻂﮐﺸﺖ 30 ﻣﯿﻠﯽﻟﯿﺘﺮيﺣﺎوي 250 ﺗﮑﺮار،ﻣﻨﺘﻘﻞ 3در، ﺣﺎويﻏﻠﻈﺖﻫﺎيﻣﺨﺘﻠﻒﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮ دور در دﻗﯿﻘﻪ، دﻣﺎي 120 و داﺧﻞ ﺷﯿﮑﺮ اﻧﮑﻮﺑﺎﺗﻮر ﺑﺎ درﺟﻪﺳﺎﻧﺘﯽﮔﺮادودرﺗﺎرﯾﮑﯽﻧﮕﻬﺪاريﺷﺪﻧﺪ.ﭘﺲاز 25 ﺳﺎﻋﺖ از زﻣﺎن ﺗﯿﻤﺎر، رﯾﺸﻪﻫﺎي 72 و 48 ،24 ﮔﺬﺷﺖ MS ﺧﺎرج و ﺑﻪ ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ MS ﻣﻮﺋﯿﻦ از ﻣﺤﯿﻂ ﮐﺸﺖ ﻣﺎﯾﻊﻋﺎريازﻣﺤﺮكاﻧﺘﻘﺎلﯾﺎﻓﺘﻨﺪ.ﭘﺲازﮔﺬﺷﺖﯾﮏﻫﻔﺘﻪ، رﯾﺸﻪﻫﺎي ﻣﻮﺋﯿﻦ ﺑﺮداﺷﺖ و ﺑﻌﺪ از ﺷﺴﺘﺸﻮ ﺑﺎ آب ﻣﻘﻄﺮ و ﺣﺬف رﻃﻮﺑﺖ اﺿﺎﻓﯽ رﯾﺸﻪﻫﺎ ﺑﻪوﺳﯿﻠﻪﮐﺎﻏﺬﺻﺎﻓﯽ، وزنﺗﺮ روز2 آﻧﻬﺎ اﻧﺪازهﮔﯿﺮيﺷﺪ.ﺳﭙﺲرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦﺑﻪﻣﺪت درﺟﻪﺳﺎﻧﺘﯽﮔﺮادﻫﻮاﺧﺸﮏﺷﺪهووزن 25 دردﻣﺎياﺗﺎق، ﺧﺸﮏآﻧﻬﺎ ﺛﺒﺖﮔﺮدﯾﺪ. اﺳﺘﺨﺮاجآﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎ و ﻫﻤﮑﺎران Kamada اﺳﺘﺨﺮاج آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎ ﺑﻪ روش (ﺑﺎاﻧﺪﮐﯽﺗﻐﯿﯿﺮاﻧﺠﺎمﺷﺪ.ﻣﻄﺎﺑﻖﺑﺎاﯾﻦروش،ﻣﻘﺪار 1986) ﮔﺮمازرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦﺧﺸﮏ،ﭘﻮدروﺑﻌﺪﮐﻠﺮوﻓﺮم، 0/5 ﺑﻪ ﻧﻤﻮﻧﻪﻫﺎي 1: 5: 15 ﺑﻪ ﻧﺴﺒﺖ ،%25 ﻣﺘﺎﻧﻮل و آﻣﻮﻧﯿﺎك دﻗﯿﻘﻪ در ﻣﻌﺮض 10 ﮔﯿﺎﻫﯽ اﺿﺎﻓﻪ ﺷﺪه و ﺑﻪﻣﺪت اوﻟﺘﺮاﺳﻮﻧﯿﮏﻗﺮارﮔﺮﻓﺘﻨﺪ.ﭘﺲازﻋﺒﻮرازﺻﺎﻓﯽودوﻣﺮﺗﺒﻪ ﻣﯿﻠﯽﻟﯿﺘﺮ ﮐﻠﺮوﻓﺮم، ﺑﺮاي ﺗﺒﺨﯿﺮ 1 ﺷﺴﺘﺸﻮي ﮐﺎﻏﺬ ﺻﺎﻓﯽ ﺑﺎ ﻣﺮﺣﻠﻪ ﮐﻠﺮوﻓﺮﻣﯽ از دﺳﺘﮕﺎه روﺗﺎري اواﭘﺮاﺗﻮر اﺳﺘﻔﺎده ﻣﯿﻠﯽﻟﯿﺘﺮ 5 ﮔﺮدﯾﺪ. ﺑﻪ ﻋﺼﺎره ﺑﺎﻗﯽﻣﺎﻧﺪه و ﺧﺸﮏ ﺷﺪه، ﻧﺮﻣﺎل اﺿﺎﻓﻪ و 1 ﻣﯿﻠﯽﻟﯿﺘﺮ اﺳﯿﺪ ﺳﻮﻟﻔﻮرﯾﮏ 2 ﮐﻠﺮوﻓﺮم و ﮐﺎﻣﻼًﻫﻢزدهﺷﺪ.درﻣﺮﺣﻠﻪﺑﻌﺪ،ﺑﺎرﯾﺨﺘﻦﻣﺨﻠﻮطﺑﺪﺳﺖ آﻣﺪهداﺧﻞدﮐﺎﻧﺘﻮردوﻣﺮﺣﻠﻪﺗﺸﮑﯿﻞﺷﺪ.ﻣﺮﺣﻠﻪﮐﻠﺮوﻓﺮﻣﯽ ﺟﺪا و دور رﯾﺨﺘﻪ ﺷﺪ و ﻣﺮﺣﻠﻪ آﺑﯽ ﺣﺎوي آﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎ ﺑﻪ آنرويﯾﺦوﺑﻪوﺳﯿﻠﻪآﻣﻮﻧﯿﺎك pH ﯾﮏﺑﺸﺮﻣﻨﺘﻘﻞﺷﺪو ﺗﻨﻈﯿﻢ ﮔﺮدﯾﺪ. ﻣﺤﻠﻮل ﻗﻠﯿﺎﯾﯽ داﺧﻞ دﮐﺎﻧﺘﻮر 10 %ﺗﺎ 28 ﻣﯿﻠﯽﻟﯿﺘﺮودو 2 رﯾﺨﺘﻪﺷﺪوآﻟﮑﺎﻟﻮﺋﯿﺪﻫﺎﯾﮏﻣﺮﺗﺒﻪﺗﻮﺳﻂ ﻣﯿﻠﯽﻟﯿﺘﺮ ﮐﻠﺮوﻓﺮم اﺳﺘﺨﺮاج ﺷﺪﻧﺪ. ﻣﺮﺣﻠﻪ 1 ﻣﺮﺗﺒﻪ ﺗﻮﺳﻂ ﮐﻠﺮوﻓﺮﻣﯽﺑﺪﺳﺖآﻣﺪهﭘﺲازاﻓﺰودنﺳﻮﻟﻔﺎتﺳﺪﯾﻢﺧﺸﮏ ﺑﻪﻣﻨﻈﻮرﺣﺬفآبﻣﻮﺟﻮد،ازﺻﺎﻓﯽﻋﺒﻮردادهﺷﺪهوﮐﺎﻏﺬ ﻣﯿﻠﯽﻟﯿﺘﺮ ﮐﻠﺮوﻓﺮم ﺷﺴﺘﺸﻮ داده ﺷﺪ. 2 ﺗﺎ 1 ﺻﺎﻓﯽ ﺗﻮﺳﻂ ﻣﺤﻠﻮل ﺻﺎف ﺷﺪه ﺑﻪوﺳﯿﻠﻪ روﺗﺎري اواﭘﺮاﺗﻮر در دﻣﺎي درﺟﻪ ﺳﺎﻧﺘﯽﮔﺮاد ﺗﺒﺨﯿﺮ و ﺟﺎﻣﺪ ﺑﺪﺳﺖ آﻣﺪه در 40 ﻣﯿﻠﯽﻟﯿﺘﺮﻣﺘﺎﻧﻮلﺧﺎﻟﺺﺣﻞﺷﺪ.

ﺗﺄﺛﯿﺮﻣﺤﺮكﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮﺑـﺮ رﺷـﺪ رﯾﺸـﻪ ﻫـﺎي ﻣـﻮﺋﯿﻦ ﺑﺬراﻟﺒﻨﺞﻣﺸﺒﮏ ﻧﺘﺎﯾﺞﻣﻘﺎﯾﺴﻪﻣﯿﺎﻧﮕﯿﻦاﺛﺮاتاﺻﻠﯽواﺛﺮﻣﺘﻘﺎﺑﻞﻏﻠﻈﺖ وزﻣﺎنﺗﯿﻤﺎرﺑﺎﻣﺤﺮكﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤـﺮ ﻧﺸـﺎن دادﮐـﻪ اﺛـﺮ اﺻﻠﯽﺳﻄﻮحﻣﺨﺘﻠﻒﻏﻠﻈﺖوزﻣﺎنﺗﯿﻤـﺎر ﺑـﻪ ﺗﺮﺗﯿـﺐ در %ﺗﺄﺛﯿﺮﻣﻌﻨﯽداريﺑﺮوزنﺗﺮرﯾﺸـﻪ ﻫـﺎي 1 ﺳﻄﺢاﺣﺘﻤﺎل ﻣﻮﺋﯿﻦﺑﺬراﻟﺒﻨﺞﻣﺸﺒﮏداﺷﺖ.ﻧﺘﺎﯾﺞﻧﺸﺎنداد ﮐﻪﺗﯿﻤﺎرﺑﺎ ﻏﻠﻈﺖﻫﺎيﻣﺨﺘﻠﻒﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮﻣﻨﺠﺮﺑﻪﮐﺎﻫﺶﻣﻌﻨﯽدار وزنﺗﺮرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦدرﻣﻘﺎﯾﺴﻪﺑﺎﮐﺸﺖﻫـﺎي ﺷـﺎﻫﺪ ﮔـﺮم( 6/59) ﮔﺮدﯾﺪ.ﺑﻪﻃﻮريﮐﻪﮐﻤﺘﺮﯾﻦﻣﯿﺰانوزنﺗـﺮ ﮔـﺮم( ﺗﺤـﺖ 9/25) رﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦدرﻣﻘﺎﯾﺴﻪﺑﺎﺷﺎﻫﺪ ﻣﯿﻠﯽﮔﺮمﺑﺮﻟﯿﺘﺮﻣﺤﺮكﺑﺪﺳﺖ 250 ﺗﺄﺛﯿﺮﺗﯿﻤﺎرﺑﺎﻏﻠﻈﺖ (.ﻣﻘﺎﯾﺴﺎتﻣﯿﺎﻧﮕﯿﻦاﺛـﺮ اﺻـﻠﯽ زﻣـﺎن ﻫـﺎي 2 آﻣﺪ)ﺷﮑﻞ ﻣﺨﺘﻠﻒﺗﯿﻤﺎرﺑﺮوزنﺗﺮرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣـﻮﺋﯿﻦ ﻧﺸـﺎن دادﮐـﻪ ﮔـﺮم( وزنﺗـﺮ 6/85) ﮔـﺮم( وﮐﻤﺘـﺮﯾﻦ 8/16)ﺑﯿﺸﺘﺮﯾﻦ ﺳﺎﻋﺖﺗﯿﻤﺎرﺑﺎﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮ 72و24 ﺑﻪﺗﺮﺗﯿﺐدرزﻣﺎن (.ﻃﺒﻖﻧﺘﺎﯾﺞﺑﺪﺳـﺖ آﻣـﺪه ﺳـﻄﻮح 4 ﻣﺸﺎﻫﺪهﺷﺪ )ﺷﮑﻞ ﻣﺨﺘﻠﻒﻏﻠﻈـﺖ وزﻣـﺎن ﺗﯿﻤـﺎر ﺑـﺎ ﻋﺼـﺎره ﻣﺨﻤـﺮ ﺗـﺄﺛﯿﺮ ﻣﻌﻨــﯽداريﺑــﺮﻣﯿــﺰانوزنﺧﺸــﮏرﯾﺸــﻪﻫــﺎيﻣــﻮﺋﯿﻦ P ) ﺗﯿﻤﺎرﺷﺪهﻧﺪاﺷﺖ <(.ﺑﺎاﯾـﻦ ﺣـﺎل، ﺣـﺪاﮐﺜﺮ وزن 0.01
ﮔﺮم(ﻣﺮﺑﻮطﺑﻪرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦﺷـﺎﻫﺪ و 0/52)ﺧﺸﮏ ﮔﺮم(ﻣﺮﺑﻮطﺑﻪرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦﺗﯿﻤـﺎر 0/45) ﺣﺪاﻗﻞآن ﻣﯿﻠﯽﮔﺮمﺑﺮﻟﯿﺘﺮﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮﺑﻮد. 250 ﺷﺪهﺑﺎﻏﻠﻈﺖ ﺗـــﺄﺛﯿﺮﻣﺤـــﺮكﻋﺼـــﺎرهﻣﺨﻤـــﺮﺑـــﺮﻣﯿـــﺰانﻓﻌﺎﻟﯿـــﺖ آﻧﺘﯽاﮐﺴﯿﺪاﻧﯽﮐﻞرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦﺑﺬراﻟﺒﻨﺞﻣﺸﺒﮏ ﻣﻘﺎﯾﺴﻪﻣﯿﺎﻧﮕﯿﻦاﺛﺮﻣﺘﻘﺎﺑﻞﺳـﻄﻮح ﻣﺨﺘﻠـﻒ ﻏﻠﻈـﺖ و زﻣﺎنﺗﯿﻤﺎرﺑﺎﻣﺤﺮكﻋﺼﺎرهﻣﺨﻤﺮﻧﺸـﺎن دادﮐـﻪ ﻣﯿـﺰان ﻓﻌﺎﻟﯿﺖآﻧﺘﯽاﮐﺴﯿﺪاﻧﯽرﯾﺸﻪﻫﺎيﻣﻮﺋﯿﻦﺑﺬراﻟﺒﻨﺞﻣﺸﺒﮏدر ﺑﻪﻃﻮرﻣﻌﻨﯽداريﺗﺤﺖﺗﺄﺛﯿﺮﻏﻠﻈـﺖ و ،%1 ﺳﻄﺢاﺣﺘﻤﺎل (.ﺑـﻪ ﻃـﻮري ﮐـﻪ 1 زﻣﺎنﺗﯿﻤﺎرﻗﺮارﮔﺮﻓﺘﻪاﺳـﺖ )ﺟـﺪول ﺑﯿﺸﺘﺮﯾﻦﻣﯿﺰانﻓﻌﺎﻟﯿﺖآﻧﺘـﯽ اﮐﺴـﯿﺪاﻧﯽ دراﺛـﺮ ﺗﯿﻤـﺎر ﺑـﺎ ﻣﯿﻠﯽﮔﺮمﺑـﺮ ﻟﯿﺘـﺮ ﻋﺼـﺎره ﻣﺨﻤـﺮ ﺑـﻪ ﻣـﺪت 250ﻏﻠﻈﺖ ﺳﺎﻋﺖﻣﺸﺎﻫﺪهﮔﺮدﯾﺪﮐـﻪ ﻧﺴـﺒﺖ ﺑـﻪ ﺷـﺎﻫﺪ ﺣـﺪود 48 ﺑﺮاﺑﺮاﻓﺰاﯾﺶﻧﺸﺎندادوﮐﻤﺘﺮﯾﻦﻣﯿﺰانآنﺗﺤﺖﺗـﺄﺛﯿﺮ 3 ﻣﯿﻠﯽﮔﺮمﺑﺮﻟﯿﺘﺮﻋﺼـﺎره ﻣﺨﻤـﺮ ﺑـﻪ 125 ﺗﯿﻤﺎرﺑﺎﻏﻠﻈﺖ ﺳﺎﻋﺖﺑﺪﺳﺖآﻣﺪ.ﻫﻤﭽﻨﯿﻦﺑـﺎ اﻓـﺰاﯾﺶ ﻣـﺪت 72ﻣﺪت زﻣﺎنﺗﯿﻤﺎر،ﻣﯿﺰانﻓﻌﺎﻟﯿﺖآﻧﺘﯽاﮐﺴﯿﺪاﻧﯽﮐـﻞ رﯾﺸـﻪ ﻫـﺎي .( ﻣﻮﺋﯿﻦروﻧﺪﮐﺎﻫﺸﯽداﺷﺖ

منبع : جهاد کشاورزی